国自然项目和文章的挽救实验，你的认识到哪层？

梦醒一场空丨

来源：市场资讯
- P) o) z/ Q8 z+ |# E1 ^* e/ K（来源：课题指南针）
上两期说了挽救实验的两种情况：同一个基因的沉默和过表达、以及A通过B调控的作用。今天我们说第三层：为什么要做分子的结构域和氨基酸突变的挽救实验？
国自然科学假说是这样的：A作为蛋白苏木化修饰酶，通过对B蛋白进行苏木化修饰（SUMOylation），进而诱导B蛋白的磷酸化修饰及细胞核转位，从而启动下游转录调控程序，进而促进周细胞向成纤维细胞转分化，最后促进纤维化和疾病进展。
上面的研究主题比较适合青C项目，细胞与分子层面的亮点有两个：
1）周细胞向成纤维细胞转分化；
2）A对B蛋白的苏木化修饰及其介导的转录重编程。
在这个项目中，为什么要做A和B蛋白的结构域截断体以及氨基酸突变的挽救实验呢？
) f- t, ~) @6 T6 j8 V因为假说默认了：
1 R' ]+ o( h: E1 N5 X0 `4 ~1 k: ^" ?+ O1）B的苏木化是后续事件（磷酸化和核转位）的必要条件；
2）A是通过其自身的苏木化酶活性直接作用的。
; v0 f' o0 r) S; l% M' @但科学要求我们排除例外：
1 ^3 o$ ~1 J3 a) S3 _% \伴随现象：苏木化只是磷酸化/核转位的伴随现象，而非原因。
8 S& n5 f( W7 q# Q% R; d间接作用：A可能只是招募了真正的苏木化酶C。
7 j$ |; R6 x! N) e4 H其它功能：A可能是通过其非酶活性的其他结构域（如D域）来起作用的。
因此，必须挽救实验来验证：
0 O; d' G3 X  k- @1 t" }1. B蛋白苏木化位点突变实验（如K→R）：当B无法被苏木化后，A是否还能促进其磷酸化和核转位？
若不能，则证明苏木化是必要的；若能，则假说不成立（可能是伴随现象）。
2. A蛋白苏木化酶活性结构域突变实验：当A失去酶活性后，是否还能促进B的苏木化及下游事件？
若不能，则证明是A亲自执行的修饰，而非间接招募其它蛋白。
/ X( l! R% S- S5 X# M. p3. A蛋白与B蛋白结合结构域缺失实验：当A无法结合B后，是否还能影响B？
若不能，则证明二者的直接相互作用是功能基础。