国自然项目和文章的挽救实验，你的认识到哪层？

梦醒一场空丨

来源：市场资讯
2 r. h- \3 o3 l! d5 p4 t# y（来源：课题指南针）
7 }5 i' H& G0 \) F8 Y9 {上两期说了挽救实验的两种情况：同一个基因的沉默和过表达、以及A通过B调控的作用。今天我们说第三层：为什么要做分子的结构域和氨基酸突变的挽救实验？
8 v7 \# D: z  ~6 o# D$ i国自然科学假说是这样的：A作为蛋白苏木化修饰酶，通过对B蛋白进行苏木化修饰（SUMOylation），进而诱导B蛋白的磷酸化修饰及细胞核转位，从而启动下游转录调控程序，进而促进周细胞向成纤维细胞转分化，最后促进纤维化和疾病进展。
: N8 Z! {/ s0 Z/ d6 R) g) S8 |* A上面的研究主题比较适合青C项目，细胞与分子层面的亮点有两个：
1）周细胞向成纤维细胞转分化；
2）A对B蛋白的苏木化修饰及其介导的转录重编程。
+ G. C" W( K. t8 v在这个项目中，为什么要做A和B蛋白的结构域截断体以及氨基酸突变的挽救实验呢？
* w1 ?- l  Q% v7 n) G4 _# j因为假说默认了：
1）B的苏木化是后续事件（磷酸化和核转位）的必要条件；
/ c$ F' v0 h( n5 I' I2）A是通过其自身的苏木化酶活性直接作用的。
但科学要求我们排除例外：
2 E2 _; |3 j2 t$ o伴随现象：苏木化只是磷酸化/核转位的伴随现象，而非原因。
9 r% Q, Z' t  Q; x  D! o5 `. G间接作用：A可能只是招募了真正的苏木化酶C。
' F, V4 W" W/ b8 [) Q其它功能：A可能是通过其非酶活性的其他结构域（如D域）来起作用的。
: C7 v* Y% |0 q2 I因此，必须挽救实验来验证：
1. B蛋白苏木化位点突变实验（如K→R）：当B无法被苏木化后，A是否还能促进其磷酸化和核转位？
若不能，则证明苏木化是必要的；若能，则假说不成立（可能是伴随现象）。
) ?& l6 d5 y4 ~- }" t) k7 @7 B2. A蛋白苏木化酶活性结构域突变实验：当A失去酶活性后，是否还能促进B的苏木化及下游事件？
( B- j3 O5 ?; r' E, n- t0 V若不能，则证明是A亲自执行的修饰，而非间接招募其它蛋白。
3. A蛋白与B蛋白结合结构域缺失实验：当A无法结合B后，是否还能影响B？
若不能，则证明二者的直接相互作用是功能基础。